PCR-analyse: wat is het? Hoe de PCR-test correct uit te voeren

Nog niet zo lang geleden, een betrouwbare,zeer gevoelige en snelle methode voor de diagnose van diverse infectieziekten bij de mens. Een dergelijke werkwijze heet "PCR-analyse". Wat is het, wat is de essentie, wat hij micro-organismen kunnen identificeren en hoe het te nemen, zullen we beschrijven in dit artikel.

Geschiedenis van ontdekking

Hij vond een polymerase kettingreactie (PCR)Amerikaanse wetenschapper Cary Myullis in 1983. Aanvankelijk gepatenteerd de methode van diagnose door het bedrijf "Cetus Corporation", waarin zijn schepper werkte. Maar in 1992 werden alle rechten en patenten verkocht aan het bedrijf "Hoffman-La Roche". Daarna bleek dat parallelle vergelijkbare onderzoeken werden uitgevoerd en werden opgenomen door andere Amerikaanse biologen, zoals Alice Chen, David Edgar, John Treel. In 1980 behandelden de Sovjetwetenschappers A. Slyusarenko, A. Kaledin en S. Gorodetsky dit probleem. Daarom was het onmogelijk om de enige rechthebbende te bepalen. Veel uitstekende biochemici hebben bijgedragen aan de ontwikkeling van de polymerasekettingreactiemethode en hebben hun innovaties gepatenteerd. Op dit moment wordt PCR-analyse overal uitgevoerd in speciaal uitgeruste laboratoria.

De essentie van de PCR-diagnostische methode

PCR-analyse: wat is het en hoe werkt het? De essentie van de methode is om te groeien in een specifiek microbieel medium door middel van een speciaal enzym van DNA-polymerase onder kunstmatige omstandigheden. Om dit te doen, vermenigvuldigt u het bestaande DNA-materiaal. Aldus zal, in de aanwezigheid van een pathogeen micro-organisme in het monster, de hoeveelheid ervan worden verhoogd door biochemische laboratoriummanipulaties en de bacterie kan niet worden gedetecteerd in een microscoop.

PCR-analyse - wat is het?

Hoe wordt het materiële onderzoek uitgevoerd?

De analyse vereist:

  • De DNA-matrijs;
  • primers die de uiteinden van een fragment van materiaal verbinden;
  • een thermisch stabiel DNA-polymerase-enzym;
  • chemische stoffen die zorgen voor de goede werking van enzymen;
  • een bufferoplossing die nodig is om geschikte omstandigheden te creëren voor de groei en ontwikkeling van DNA-materiaal.

    PCR-analyse 12

Om PCR uit te voeren, worden 25-30 herhalingen uitgevoerd, bestaande uit drie stadia: denaturatie, annealing en verlenging.

Voor de analyse van de polymerasekettingreactiegebruik een speciaal apparaat - een versterker. Met moderne apparatuur kunt u het benodigde programma instellen voor het verwarmen en koelen van de buizen om fouten tijdens de diagnose te voorkomen.

Waar wordt de diagnose gebruikt?

De methode van polymerasekettingreactie wordt gebruikt op verschillende gebieden van de geneeskunde:

  • Forensische wetenschappers gebruiken het om genetisch materiaal te identificeren, zoals haar, speeksel of bloed;
  • PCR-bloedanalyse helpt bij genotypering, bijvoorbeeld om een ​​individuele genetisch gemanipuleerde reactie op een specifiek medicijn te detecteren;
  • stel met behulp van een dergelijke methode het bestaan ​​vast van familiebanden tussen mensen;
  • de meest populaire PCR-methode is geworden in de medische diagnostiek voor de definitie van verschillende infectieziekten.

Welke infecties onthullen PCR?

Dus, de geneeskunde heeft lang en met succes de analyse van PCR gebruikt. Wat is het, we hebben het al geleerd. En welke pathogenen kunnen ermee worden gedetecteerd? De volgende infectieziekten worden gediagnosticeerd met PCR:

  • hepatitis A, B, C;
  • ureaplasmosis;
  • candidiasis;
  • chlamydia;
  • mycoplasmose;
  • bacteriële vaginose;
  • infectieuze mononucleosis;
  • trichomoniasis;
  • papillomavirus-infectie;
  • tuberculose;
  • herpes-infectie van het 1e en 2e type;
  • Helicobacter pylori-infectie;
  • cytomegalovirus;
  • difterie;
  • salmonellose;
  • HIV-infectie.

    PCR-analyse voor HIV

Ook worden PCR-methoden gebruikt bij de diagnose van kanker.

voordelen van de werkwijze

Diagnose PCR heeft verschillende voordelen:

  1. Hoge gevoeligheid. Zelfs met slechts een paar DNA-moleculen van het micro-organisme, bepaalt de PCR-analyse de aanwezigheid van een infectie. De methode helpt bij chronische en latente ziekten. Vaak is in dergelijke gevallen het micro-organisme op andere manieren niet-gecultiveerd.
  2. Voor de studie is elk materiaal, zoals speeksel, bloed, geslacht, haar, epitheelcellen, geschikt. De meest voorkomende is een bloedtest en een urogenitale uitstrijkje op PCR.

    PCR: doe de test

  3. Het vereist geen langdurige teelt. Met geautomatiseerd diagnostisch proces kunt u de resultaten van het onderzoek na 4-5 uur verkrijgen.
  4. De methode is bijna 100% betrouwbaar. Slechts enkele gevallen van een fout-negatief resultaat werden geregistreerd.
  5. Het vermogen om verschillende typen te identificerenziekteverwekkers uit een enkele steekproef van materiaal. Dit versnelt niet alleen het proces van diagnose van de ziekte, maar vermindert ook aanzienlijk de materiaalkosten. Vaak schrijft de arts een uitgebreide PCR-analyse voor. De prijs van het onderzoek, bestaande uit de definitie van zes pathogenen, is ongeveer 1500 roebel.

Aanbevelingen voor de voorbereiding van de analyse

Om de resultaten betrouwbaar te laten zijn in de PCR-studie, moet de analyse worden uitgevoerd volgens de aanbevelingen voor de voorlopige voorbereiding van de diagnose:

  1. Voordat u speeksel opgeeft, moet u afzien van het innemen van voedsel en medicatie 4 uur voordat u het materiaal inneemt. Spoel onmiddellijk voor de ingreep uw mond met gekookt water.
  2. De bovenstaande regels moeten worden gevolgd bij het nemen van een monster van de binnenkant van de wang. Na spoelen wordt aanbevolen om een ​​lichte huidmassage uit te voeren om de afscheiding van de klier te isoleren.
  3. Urine wordt meestal thuis geoogst. Om dit te doen, moet je een grondig toilet van de geslachtsdelen uitvoeren. Het is noodzakelijk om 50-60 ml urine te verzamelen in een steriele plastic container. Om de zuiverheid van het materiaal te garanderen, wordt het aanbevolen dat vrouwen een tampon in de vagina inbrengen en mannen maximaal de huidplooi trekken. Je kunt het materiaal niet tijdens de menstruatie nemen.
  4. Voor sperma moet je je onthouden van seksueel gedragHandel 3 dagen vóór de verzameling. Ook adviseren artsen om te weigeren om de sauna te bezoeken en een warm bad te nemen, alcohol te drinken en gekruid eten. 3 uur voor de test, moet u afzien van urineren.
  5. Voor afgifte van urogenitale uitstrijk, bijvoorbeeld alseen analyse wordt uitgevoerd op chlamydia PCR, zowel vrouwen als mannen worden aanbevolen seksuele rust gedurende 3 dagen. 2 weken voor de test mogen geen antibacteriële geneesmiddelen worden gebruikt. Gedurende een week moet u stoppen met het gebruik van intieme gels, zalven, vaginale zetpillen, spuiten. 3 uur voor de test, moet u afzien van urineren. Tijdens de menstruatie wordt de verzameling van het materiaal niet uitgevoerd, maar pas na 3 dagen na het stoppen van de bloedafname kan het urogenitale uitstrijkje nemen.

PCR tijdens zwangerschap

In de periode van verwachting van de baby veel besmettelijkSeksueel overdraagbare aandoeningen zijn uiterst gevaarlijk voor de normale ontwikkeling van de foetus. SOA's kunnen intra-uteriene groeiachterstand, miskraam of vroeggeboorte, aangeboren misvormingen van het kind veroorzaken. Daarom is het uitermate belangrijk om een ​​vroege PCR-test te doorstaan. Het is noodzakelijk om de analyse in te dienen bij het registreren - tot 12 weken.

Analyse op Chlamydia PCR

Hekmateriaal komt van het cervicale kanaalmet behulp van een speciale borstel. De procedure is pijnloos en vormt geen gevaar voor de baby. Gewoonlijk wordt tijdens de zwangerschap chlamydia geanalyseerd met behulp van de PCR-methode, evenals ureaplasmosis, mycoplasmose, cytomegalovirus, herpes en papillomavirus. Een dergelijk complex van onderzoeken wordt PCR-6 genoemd.

PCR voor HIV-diagnose

In verband met het feit dat de methode van polymerasekettingreactiede reactie is erg gevoelig voor veranderingen in het lichaam en de omstandigheden van de diagnose, veel factoren kunnen het resultaat beïnvloeden. Daarom is PCR-analyse voor HIV-infectie geen betrouwbare methode, de effectiviteit ervan is 96-98%. In de overige 2-4% van de gevallen levert de test vals positieve resultaten op.

Maar in sommige situaties zonder PCR-diagnose van HIVniet te beheren. Gewoonlijk wordt het toegediend aan mensen met een fout-negatief ELISA-resultaat. Zulke indicatoren geven aan dat de persoon nog geen antilichamen tegen het virus heeft ontwikkeld en ze kunnen niet worden gedetecteerd zonder een meervoudige toename van het aantal. Dit kan worden bereikt door een bloedtest uit te voeren met behulp van een PCR-methode.

Ook is deze diagnose noodzakelijk voor kinderen van het eerste levensjaar die zijn geboren uit een hiv-positieve moeder. De methode is de enige manier om de status van een kind betrouwbaar te bepalen.

PCR voor de diagnose van hepatitis

De polymerasekettingreactiemethode maakt het mogelijkDNA van het hepatitis A-, B-, C-virus detecteren lang voordat antilichamen tegen infectie worden gevormd of als er symptomen van de ziekte verschijnen. In het bijzonder effectief is de analyse van PCR voor hepatitis C, omdat in 85% van de gevallen een dergelijke ziekte asymptomatisch verloopt en zonder tijdige behandeling in een chronisch stadium overgaat.

PCR bloedtest

Tijdige detectie van de ziekteverwekker zal complicaties en langdurige behandeling helpen voorkomen.

Comprehensive PCR Survey

Complexe PCR-analyse: wat is het?Deze testmethode polimezarnoy kettingreactie gelijktijdig bepalen omvat verschillende soorten infecties: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealitikum, herpes 1 en 2 type papillomavirus gonorroe. De prijs van deze diagnose varieert van 2.000 tot 3.500 roebel. afhankelijk van de kliniek, materialen en apparatuur, evenals over de aard van de analyse: kwalitatief of kwantitatief. Wat nodig is in uw geval - de dokter beslist. In sommige gevallen, je gewoon op te sporen van de aanwezigheid van de ziekteverwekker in anderen, zoals HIV, de belangrijke rol van kwantitatieve titer. aangeduid als "PCR-analyse van 12" bij de diagnose van alle bovengenoemde pathogenen onderzoek.

Uitleg van analyseresultaten

Het decoderen van de PCR-analyse is niet moeilijk.Er zijn slechts 2 schalen van de indicator - "positief resultaat" en "negatief resultaat". Als een pathogeen wordt gedetecteerd, kunnen artsen de aanwezigheid van de ziekte bevestigen met een betrouwbaarheid van 99% en doorgaan met de behandeling van de patiënt. In de kwantitatieve methode voor het bepalen van de infectie in de overeenkomstige kolom, zal de numerieke waarde van de gedetecteerde bacteriën worden aangegeven. Alleen een arts kan de ernst van de ziekte bepalen en de noodzakelijke behandeling voorschrijven.

Waar de PCR-analyse doorgeven?

In sommige gevallen, bijvoorbeeld bij het bepalenHIV-infectie door de PCR-methode, met een negatief resultaat, wordt het noodzakelijk om aanvullende onderzoeken uit te voeren om de resultaten te bevestigen.

Waar de analyse te maken?

Waar de PCR-analyse in te dienen:in de polikliniek van de staat of in een privé-laboratorium? Helaas zijn apparatuur en methoden in gemeentelijke medische instellingen vaak verouderd. Daarom is het beter om de voorkeur te geven aan privélaboratoria met moderne apparatuur en hooggekwalificeerd personeel. Bovendien krijg je in een privékliniek veel sneller resultaten.

In Moskou bieden veel privélaboratoria aanuitvoeren van PCR-analyse op verschillende infecties. In klinieken zoals Vita, Complex Clinic, Happy Family en Uro-Pro wordt bijvoorbeeld PCR-analyse uitgevoerd. De prijs van het onderzoek is van 200 roebel. voor de definitie van één pathogeen.

Er kan worden geconcludeerd dat de diagnose infectieus isPCR is in de meeste gevallen een snelle en betrouwbare manier om de ziekteverwekker in het lichaam te detecteren in een vroeg stadium van de infectie. Maar in bepaalde gevallen is het de moeite waard om andere diagnosemethoden te kiezen. De noodzaak om een ​​dergelijk onderzoek uit te voeren, kan alleen door een specialist worden bepaald. Voor het decoderen van de PCR-analyse is ook een professionele aanpak vereist. Volg de aanbevelingen van de arts en geef geen zelftests, die niet noodzakelijk zijn.

leuk vond:
0
Urinalyse door Nechiporenko. Hoe het te monteren
Algemene analyse van urine. Hoe te nemen en wat is de norm?
Hoe wordt fecaal occult bloed getest?
Waar kun je de teek nemen voor analyse? Wat te doen wanneer
Hoe correct de analyse van uitwerpselen over te dragen en of dit nodig is
Hoe kan bloed correct aan hormonen worden afgestaan?
Er kan een bloedtest voor HIV worden uitgevoerd
Hoe urinetest correct in te dienen?
Wat zal de urine-analyse vertellen (decodering)
Top berichten
omhoog